眼科 ›› 2013, Vol. 22 ›› Issue (2): 105-109.
韩竹梅, 张兴儒, 张隆, 倪振华, 孙健, 符之瑄, 李青松, 项敏泓
HAN Zhu-Mei, Zhang-Xing-Ru, Zhang-Long, Ni-Zhen-Hua, Sun-Jian, Fu-Zhi-Xuan, Li-Qing-Song, Xiang-Min-Hong
摘要: 目的 研究组织贴壁法原代培养结膜松弛症球结膜成纤维细胞,并对细胞进行鉴定,为结膜松弛症体外实验提供大量的细胞。设计 实验研究。研究对象 体外培养的人结膜松弛症球结膜成纤维细胞。方法 以结膜松弛症患者手术切除的球结膜为材料,采用组织贴壁法培养细胞,胰酶消化、传代,并对细胞进行形态学观察、免疫荧光鉴定、流式细胞术检测成纤维细胞胞浆特异性蛋白的表达。主要指标 细胞形态、结构、纯度。结果 组织块贴壁法原代培养2~5天见组织块能紧密贴附于六孔板,倒置显微镜下观察组织块周围有细胞溢出,10~15天即可见细胞增生,细胞呈马赛克样,界线不清。传代至第2代细胞倒置显微镜下观察形态一致,大小均一,呈放射状排列,为长梭形或两头尖的长条状,胞质中有一个卵圆形的细胞核,周围有长短不等的细胞突起相互交联。细胞免疫化学染色,荧光显微镜下可见结膜松弛症球结膜成纤维细胞Vimentin表达阳性,Keratin(C11)表达阴性。流式细胞术检测成纤维细胞Vimentin表达阳性,Keratin(C11)表达阴性。结论 采用组织贴壁法培养能够获得稳定的结膜松弛症球结膜成纤维细胞,经形态学观察、免疫荧光鉴定及流式细胞术检测为结膜松弛症球结膜成纤维细胞。(眼科, 2013, 22: 105-108)